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脂肪酸類 - 甘油三酯(TG)含量檢測試劑盒說明書

脂肪酸類 - 甘油三酯(TG)含量檢測試劑盒說明書

Triglyceride (TG) Content Assay kit

一、甘油三酯(TG)含量檢測試劑盒產品描述 

甘油三酯(TG)是由長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不僅是細胞膜的主要成分,也是重要的 呼吸底物和供能物質,在脂肪酸運輸過程中具有重要作用。血清中內源性三酰甘油主要以 VLDL 的 形式運輸,外源性三酰甘油主要以 CM 的形式運輸,甘油三酯含量的增高與動脈粥樣硬化性心血管疾 病密切相關。 甘油三酯經 KOH 皂化水解生成甘油及脂肪酸,過碘酸氧化甘油生成甲醛,在銨離子存在下甲醛 能夠與乙酰丙酮縮合生成黃色物質,產物在 420 nm 處具有特征吸收峰,通過吸光值的變化即可定量 檢測甘油三酯的含量。


二、甘油三酯(TG)含量檢測試劑盒產品內容

甘油三酯含量檢測試劑盒說明圖1


三、甘油三酯(TG)含量檢測試劑盒產品使用說明 

        測定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽/勻漿 器、可調式移液器、臺式離心機、恒溫水浴、正庚烷、異丙醇和蒸餾水。

  1. 甘油三酯(TG)的提取(可根據預實驗結果適當調整樣本量及比例)

    ①細菌或細胞:離心收集細菌或細胞至離心管內,按照細菌或細胞數量(104 個):試劑一體積(mL) 為(500-1000):1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1 mL 試劑一)處理樣品,冰浴超聲破碎(功 率 20%或 200 W,超聲 2 s,間隔 1 s,總時間 1 min),4℃ 8000 g 離心 10 min,取上清待測。

    ②組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為 1:(5-10)的比例(建議稱取 0.1 g 組織,加 入 1 mL 試劑一)處理樣品,冰浴勻漿,4℃ 8000 g 離心 10 min,取上清待測。

    ③血清(漿)、培養液等液體樣本:直接測定或適當稀釋后再進行測定。

  2. 測定步驟

    ①分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上,調節波長至 420 nm,蒸餾水調零。

    ②在離心管中依次加入下列試劑:

  甘油三酯含量檢測試劑盒說明圖2

注:加入試劑二后需劇烈震蕩,振蕩幅度、時間、反復次數以及等待分層時間均應保持一致;

吸光值測定:取 200 μL 反應液至微量玻璃比色皿或 96 孔板中,測定 420 nm 處吸光值,記為 A 測定,A 標準和 A 空白;計算?A 測定=A 測定-A 空白,?A 標準=A 標準-A 空白。注:空白管只需測 定 1-2 次。

3.甘油三酯(TG)含量計算

甘油三酯含量檢測試劑盒說明圖3


四、甘油三酯(TG)含量檢測試劑盒注意事項 

①為確保試驗重復性,加入試劑二后需劇烈震蕩,振蕩幅度、時間、反復次數以及等待分層時間 均應保持一致,檢測體系中 65℃水浴后冷卻時間應保持一致; 

②若測定吸光值超出標準吸光值線性范圍:高于最高值將樣品使用試劑一適當稀釋后再進行測定, 低于最低值建議適當增加樣本量后再進行測定,計算時相應修改;

③檢測過程中使用具有易揮發性物質,建議在通風櫥中進行測定,并做好防護措施; 

④為保證結果準確且避免試劑損失,測定前請仔細閱讀說明書(以實際收到說明書內容為準), 確認試劑儲存和準備是否充分,操作步驟是否清楚,且務必取2-3個預期差異較大的樣本進行預測定, 過程中問題請您及時與工作人員聯系。


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文章來源:http://www.fang511.cn/newss-139.html

 

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