蛋白質羰基含量檢測試劑盒說明書 
蛋白質羰基含量檢測試劑盒描述： 蛋白質羰基是由氨基酸殘基側鏈中的氨基或亞氨基受到自由基攻擊后轉變而來，在體內主要通過
金屬離子催化氧化系統(tǒng)形成，是多種氨基酸在蛋白質氧化修飾過程中的早期標志。羰基化蛋白極易相
互交聯(lián)、聚集為大分子從而降低或失去原有蛋白質的功能，其含量能夠反應蛋白質氧化損傷的程度，
可作為衡量蛋白質氧化損傷的主要指標。
蛋白質羰基能夠與 2,4-二硝基苯肼反應生成紅色 2,4-二硝基苯腙沉淀，產物在 370 nm 處具有特
征吸收峰，通過吸光值的變化即可定量檢測蛋白質羰基的含量。
需自備試劑：乙酸乙酯（C4H8O2，MW=88.10，CAS: 141-78-6）；無水乙醇（C2H6O，MW=46.07，CAS: 64-17-5）
測定過程中所需要的儀器和試劑：紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研缽
/勻漿器、可調式移液器、臺式離心機、恒溫水浴/培養(yǎng)箱、乙酸乙酯、無水乙醇和蒸餾水。
①組織：按照組織質量（g）：提取液 A 體積（mL）為 1：（5-10）的比例（建議稱取 0.1 g 組織，
加入 1 mL 提取液 A）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 5000 rpm 離心 10 min，取全部上清至離心管中，加
入 0.1 mL 提取液 B，室溫靜置 10 min，4℃ 12000 rpm 離心 10 min，取上清即為待測樣本，置于冰上
待測。 ②細菌或細胞：離心收集細菌或細胞至離心管內，按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液 A 體積
（mL）為（500-1000）：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1 mL 提取液 A）處理樣品，冰浴超聲
破碎（功率 300 W，超聲 3 s，間隔 7 s，總時間 3 min），4℃ 12000 rpm 離心 10 min，取上清即為待測
樣本，置于冰上待測。 ③血清、培養(yǎng)液等液體樣本：直接測定或適當稀釋后再進行測定。
測定步驟： ①分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節(jié)波長至 370 nm，試劑五調零。 ②在離心管中依次加入下列試劑（避光條件下進行） 
吸光值測定：取 200 μL 反應液于 96 孔板或微量石英比色皿，測定 370 nm 處吸光值，記為 A 測
定和 A 對照，計算 ΔA 測定=A 測定-A 對照。注：每個樣品均需設一個對照組
蛋白質羰基含量檢測試劑盒說明書含量計算： 
注釋：VS5：反應體系中加入試劑五的體積，0.3 mL；V1：組織樣品提取后總體積，1.1 mL；V2：
細菌或細胞樣本提取后總體積，1 mL；V 樣：反應體系中加入待測樣本的體積，0.06 mL；ε：蛋白質
羰基消光系數，22 mL/μmol/cm；d：96 孔 UV 板光徑，0.5 cm；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣
品質量，g；細菌或細胞數量：以萬計。 
注意事項： ①提取液 B 應根據使用量現(xiàn)用現(xiàn)配，配置后置于 4℃保存，若變?yōu)楹谏珓t停止使用； ②試劑一見光易分解，反應過程需在避光條件下進行； ③試劑四為沉淀洗滌液，需重復加入三次對沉淀進行洗滌； ④為保證結果準確且避免試劑損失，測定前請仔細閱讀說明書（以實際收到說明書內容為準），
確認試劑儲存和準備是否充分，操作步驟是否清楚，且務必取2-3個預期差異較大的樣本進行預測定，
過程中問題請您及時與工作人員聯(lián)系。
蛋白質羰基含量檢測試劑盒
文章來源：http://www.fang511.cn/newss-181.html |
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