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RACE-cDNA末端快速擴(kuò)增檢測試劑盒
RACE-cDNA末端快速擴(kuò)增檢測試劑盒
品牌:原鑫生物
貨號:YX-D10200
規(guī)格:48T/96T
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race檢測試劑盒

race檢測試劑盒圖1

產(chǎn)品名稱:cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)檢測試劑盒

英文名稱 :Detection Kit for rapid amplification of CDNA ends

產(chǎn)品保存和存儲方式:在我們的產(chǎn)品未開封之前,應(yīng)該放在﹣4攝氏度下進(jìn)行恒溫保存。如果產(chǎn)品開封以后,應(yīng)該在保質(zhì)期前盡快使用,而且要在﹣20攝氏度下進(jìn)行恒溫保存。

產(chǎn)品運(yùn)輸保存:我們公司的產(chǎn)品具有一套完整的運(yùn)輸產(chǎn)業(yè)鏈,可以保證客戶當(dāng)天下單,我們當(dāng)天發(fā)貨,全程恒溫運(yùn)輸,在很大程度上面可以保證試劑活性。

產(chǎn)品保質(zhì)期:未開封以前,保質(zhì)期為六個(gè)月。 產(chǎn)品特點(diǎn):

RACE 試劑盒是一種在較高溫度下保存 RNA 樣品的非凍型無毒溶液,它能迅速滲入細(xì)胞內(nèi),通過高效抑制 RNase 的活性而保存 RNA 的完整性。

安裝步驟與維護(hù)

1. 能濃縮病毒 100 倍以上,適合各種病毒。

2. 比超速離心法、密度梯度離心分離法和過濾法更溫和,回收率更高,并且大部分病 毒能保持活性,適合各種后續(xù)實(shí)驗(yàn),包括轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)和核酸純化。

3. 比超速離心法和密度梯度離心分離法簡單,不需要大型離心機(jī)等設(shè)備。

4. 適合水樣、細(xì)胞培養(yǎng)基上清和其他不含細(xì)胞的樣品。本產(chǎn)品 100mL 可以處理 400mL 含病毒的溶液,可以將病毒濃縮 100 倍以上。


race檢測試劑盒圖2

使用方法

RACE 試劑盒使用方法 :

一:用本產(chǎn)品保存新鮮組織樣品

1. 估計(jì)完全浸沒樣品所需要本產(chǎn)品的體積(1g 組織需 10 mL)。

2. 標(biāo)記收集管并加入估計(jì)所需量的本產(chǎn)品。

3. 以*快速度將樣品剪切成厚度小于 0.5 cm 的碎塊。注: 鼠肝、腎和脾等小器官樣品和沒有蠟質(zhì)保護(hù)層的植物樣品可不需剪切而直接放入本產(chǎn)品中保存,有蠟質(zhì)保護(hù)層的植物樣品需要先將蠟表皮破壞。

4. 將組織碎塊完全浸沒于收集管的本產(chǎn)品中。

5. 將收集管存放于溫度適當(dāng)?shù)牡胤剑娣艜r(shí)間不能超過該溫度下的*長存放時(shí)間,如果要存放在-20℃或-80℃,需先將樣品在 4℃放置過夜后再轉(zhuǎn)移到*后的溫度。

二:RACE 試劑盒保存培養(yǎng)細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、細(xì)菌和 RNA 病毒:

1. 標(biāo)記收集管。

2. 將待樣品轉(zhuǎn)移到離心管中,離心收集細(xì)胞,棄上清。注:處理含病毒的樣品(如

血漿)可直接從步驟第 4 步開始。

3. 用冰浴的緩沖液洗一次。

4. 將細(xì)胞懸浮在少量緩沖液中。

5. 加入五到十倍體積的本產(chǎn)品,混均; 對病毒樣品,加入兩到三倍體積的本產(chǎn)品,混均。

6. 將收集管存放于溫度適當(dāng)?shù)牡胤剑娣艜r(shí)間不能超該溫度下的*長存放時(shí)間。

如果要存放在-20℃或-80℃,需先在4℃放置過夜后再轉(zhuǎn)移到*后溫度條件(將

樣品轉(zhuǎn)移到-20℃或-80℃前,需要倒棄保護(hù)液)。

注:樣品存放溫度與其*長存


race檢測試劑盒圖3

技術(shù)原理

SMARTTM 3'-RACE原理

利用mRNA的3' 末端的poly(A)尾巴作為一個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn),以連有SMART寡核苷酸序列通用接頭引物的Oligo(dT)30MN作為鎖定引物反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)第一鏈cDNA。然后用一個(gè)基因特異引物GSP1(gene specific primer,GSP)作為上游引物,用一個(gè)含有部分接頭序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作為下游引物,以cDNA第一鏈為模板,進(jìn)行PCR循環(huán),把目的基因3' 末端的DNA片段擴(kuò)增出來。(見下圖)

SMARTTM 5'-RACE原理

先利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作為一個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn),以O(shè)ligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉(zhuǎn)錄酶MMLV作用下,反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)第一鏈cDNA。利用該反轉(zhuǎn)錄酶具有的末端轉(zhuǎn)移酶活性,在反轉(zhuǎn)錄達(dá)到第一鏈的5' 末端時(shí)自動加上3-5個(gè)(dC)殘基,退火后(dC)殘基與含有SMART寡核苷酸序列Oligo(dG)通用接頭引物配對后,轉(zhuǎn)換為以SMART序列為模板繼續(xù)延伸而連上通用接頭(見下圖)。然后用一個(gè)含有部分接頭序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作為上游引物,用一個(gè)基因特異引物2(GSP 2 genespecific primer,GSP)作為下游引物,以SMART第一鏈cDNA為模板,進(jìn)行PCR循環(huán),把目的基因5'末端的cDNA片段擴(kuò)增出來。

最終,從2個(gè)有相互重疊序列的3'/ 5'-RACE產(chǎn)物中獲得全長cDNA,或者通過分析RACE產(chǎn)物的3'和5'端序列,合成相應(yīng)引物擴(kuò)增出全長cDNA。


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