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| 哺乳動(dòng)物總蛋白elisa提取試劑盒 |
 品牌：原鑫生物
貨號(hào)：YX-BL-18291
規(guī)格：48T/96T
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哺乳動(dòng)物總蛋白elisa提取試劑盒 
概述 該產(chǎn)品用于使用專有的裂解緩沖液從培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織提取總蛋白 特點(diǎn) 提取蛋白質(zhì)為總蛋白，整個(gè)操作過程簡(jiǎn)單省時(shí)，可用于提取培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織，可同時(shí)處理多個(gè)樣品，無需超離心。 應(yīng)用 該試劑的組成簡(jiǎn)單且與許多不同的應(yīng)用相兼容，例如報(bào)告監(jiān)測(cè)分析（例如熒光素酶，β-半乳糖苷酶，氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶），蛋白質(zhì)分析（例如PKA，PKC，酪氨酸激酶），免疫分析（例如Western印跡， ELISA，RIA）和蛋白質(zhì)純化 組份 5X Buffer , 5X NaCl , 5X SDS , 5X DOC , 5X NP-40, 20X PBS , Protease inhibitor cocktail
哺乳動(dòng)物總蛋白elisa提取試劑盒產(chǎn)品組成： 
試劑盒可以在常溫保存，除了 Protease inhibitor cocktail 需要在-20°C 保存，保質(zhì)期 24 個(gè)月。
哺乳動(dòng)物總蛋白elisa提取試劑盒提取步驟如下： 1.準(zhǔn)備：根據(jù) 5X Buffer，5X NaCl，5X SDS，5X DOC 和 5X NP-40 為 1:1:1:1:1（v / v）配制細(xì)胞裂解緩沖液，1 ml 細(xì)
胞裂解緩沖液用于 106~107 個(gè)細(xì)胞或 5~20 mg 組織的蛋白提取。使用前加入 10 μl Protease inhibitor cocktail。 2. 洗滌細(xì)胞或組織，用細(xì)胞裂解緩沖液處理:
a.對(duì)于貼壁細(xì)胞：除去需提取細(xì)胞中的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，用 PBS 緩沖液沖洗細(xì)胞兩次，加入細(xì)胞裂解緩沖液（106~107 個(gè)
cells/ml），然后將整個(gè)細(xì)胞完全浸入冰袋中，在搖床上孵育 30 分鐘，階段性將細(xì)胞在細(xì)胞裂解緩沖液中重懸?guī)状危?
后刮掉并收集裂解液。
b.對(duì)于懸浮細(xì)胞：在 700 xg 下離心 5 分鐘，棄掉上清。用 PBS 重懸洗滌細(xì)胞兩次，在 4°C 離心并去除上清液。將沉淀重
懸于細(xì)胞裂解緩沖液中（106~107 個(gè) cells/ml），浸入冰袋，在搖床上孵育 30 分鐘。
c.對(duì)于組織：將組織切成小塊，用 PBS 沖洗組織兩次。加入細(xì)胞裂解緩沖液（5~20 mg 組織/ml），將樣品（含細(xì)胞裂解
緩沖液）轉(zhuǎn)移到預(yù)冷微量勻漿器中，并在冰上均勻化組織 30~50 次。注意均質(zhì)過程對(duì)靶蛋白的功能完整性至關(guān)重要。 3. 4°C 下，12,000 xg 離心裂解的細(xì)胞 10 min 來沉淀細(xì)胞碎片或者高速離心來制備蛋白質(zhì)溶液，100,000 xg 離心 45 分鐘。 4. 將含蛋白質(zhì)的上清液移至冷凍管中。在冰上保存可立即使用或?qū)⒌鞍踪|(zhì)溶液保存在-70°C。
1.在特殊情況下，當(dāng)需要濃縮裂解物時(shí)，可以使用較低體積的裂解緩沖液裂解細(xì)胞。對(duì)于貼壁細(xì)胞，板尺寸將決定覆蓋
板表面緩沖液的量。對(duì)于懸浮液中的細(xì)胞，體積可以減少到細(xì)胞的 2X 體積。 2.如果細(xì)胞裂解緩沖液中含有所有三種洗滌劑，一些抗原可能被變性，一些蛋白質(zhì)復(fù)合物可能被破壞。在這種情況下，
必須仔細(xì)選擇合適的洗滌劑。如果要省略一種或兩種洗滌劑溶液，則使用等體積的蒸餾水來代替洗滌劑溶液。 3. 蛋白酶抑制劑混合物適合在細(xì)胞裂解緩沖液中以 1:100 的稀釋度使用。 4. 在制備細(xì)胞裂解緩沖液后，在 2~8°C 下進(jìn)行所有步驟。
5. 操作需佩戴防護(hù)眼鏡和手套，并注意安全。因?yàn)?PMSF 對(duì)健康有害，毒性非常大，并且對(duì)眼睛和皮膚有刺激性。本產(chǎn)
品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用。
哺乳動(dòng)物總蛋白elisa提取試劑盒：http://www.fang511.cn/products-376.html
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